苜蓿CRISPR_2.0载体

多叶型蛋白增产21.5%

专为自四倍体苜蓿设计的单转录本CRISPR/Cas9系统，配合超声波辅助叶盘转化与可视化毛状根筛选，能高效获得四等位纯合突变并稳定提高粗蛋白产量。

Haixia, Zhao · Zhao, Siyi · 曹英萍 · Xiping, Jiang · Zhao, Lijuan · Zhimeng, Li · Wang, Mengqi · Ruijuan, Yang · 周传恩 · Zhaoming, Wang · Feng, Yuan · 马冬梅 · 林浩 · Liu, Wenwen · 付春祥

Crop Journal 2024

参数信息

编辑效率（sgRNA3，毛状根）

83.0 %

编辑事件发生比例（靶点2）

35.1 %

平均粗蛋白产量提升

21.5 %

技术优势

单转录本设计

Cas9和gRNA由同一启动子驱动，简化载体构建，避免多个启动子间的干扰。

毛状根快速筛sgRNA

利用发根农杆菌介导的毛状根转化结合MtLAP1报告基因，通过肉眼可见的紫色即可判断编辑与否，显著缩短筛选周期。

多叶型蛋白增产

PALM1四等位纯合突变体表现为多叶型，平均粗蛋白产量比三叶型提高21.5%。

应用场景

• 苜蓿基因组编辑：在四倍体苜蓿中实现高效基因敲除，获得四等位纯合突变体。
• 牧草品质改良：通过编辑PALM1产生多叶型，提高粗蛋白产量21.5%。
• 豆科作物育种：为豆科牧草提供快速基因编辑和筛选工具，加速育种进程。
• 植物合成生物学：单转录本载体便于组装多gRNA，拓展植物合成生物学元件库。