无PAM Cas12a突变检测体系

0.001% VAF 可测

利用温度增强的无PAM CRISPR-Cas12a活化和邻近突变选择性抑制剂,无需PAM序列即可高灵敏区分单核苷酸变异,为超低丰度突变检测提供新策略。

Chen, Kena · Dai, Ling · Zhao, Jie · 宋林 · Bai, Dan · Wu, You · 周晞 · Yang, Yujun · 杨双双 · 赵林 · Chen, Xueping · 谢国明 · 李俊杰

Talanta 2023

参数信息

检测限 (VAF)
0.001 %

技术优势

无需PAM也能切

把反应温度提高到LbaCas12a的上限,再配合PCR添加剂,无PAM的反式切割活性被大幅增强,不再受靶序列中PAM位点的限制。

野生型被压住

选择性抑制剂携带额外的邻近突变,与野生型结合更强,从而优先阻断野生型等位基因的扩增或信号,让突变型脱颖而出。

灵敏度再降一个量级

模型EGFR L858R突变体可检测至0.001% VAF,比常规链置换富集方法的极限低一个数量级。

应用场景