慢生真菌高效编辑
专为生长缓慢、无孢子、高度色素化的难操纵真菌优化的CRISPR/Cas9系统,通过靶向bdpks基因可完全消除黑色素和聚酮产物,为同类真菌的基因功能研究提供了实用范例。
Zhao, Siji · Yin, Ruya · Shen, Zhen · Mou, Yan · 徐丹 · 周立刚 · 赖道万
World Journal of Microbiology and Biotechnology 2024
通过比较不同内源启动子,确定U6 snRNA-1启动子驱动sgRNA表达效率最优,可实现目标基因的可靠敲除。
靶向黑色素合成关键基因bdpks,敲除后螺双萘和黑色素完全消失,易于通过菌落颜色和产物分析确认编辑效果。
优化了原生质体制备方法,解决了该真菌细胞壁难降解、原生质体得率低的问题,使转化步骤易于重复。