CRISPR/Pepper-tDeg 成像系统

一种通过同时稳定sgRNA和荧光蛋白来实现高信噪比、单sgRNA标记非重复基因组位点的活细胞成像系统。

Chen, Meng · Huang, Xing · Shi, Yakun · Wang, Wen · Huang, Zhan · Tong, Yanli · 邹小勇 · 许宇智 · 戴宗

Advanced Science 2024

参数信息

信噪比提升

5 ×

非重复序列成像所需 sgRNA 数量

1

技术优势

信噪比提高5倍

目标依赖的稳定性开关同时作用于 sgRNA 和荧光蛋白，避免背景荧光，使端粒成像信噪比提高 5 倍。

一个 sgRNA 即可成像非重复位点

利用分裂荧光蛋白设计进一步提高信噪比，只需一个带两个适配体插入的 sgRNA 就能成像非重复序列。

无需复杂 sgRNA 设计

只需要在 sgRNA 支架上插入适配体和分裂荧光蛋白设计，不需要复杂质粒构建，降低了技术门槛。

可同时追踪多个基因组位点

通过组合两个系统，可同时标记和追踪活细胞中的端粒和着丝粒两个不同位点。

应用场景

• 基因组位点追踪：追踪端粒、着丝粒等位点的时空动态。
• 活细胞成像：在活细胞中实时观测基因组位点运动。
• 非重复序列标记：标记非重复基因或调控元件，无需复杂设计。
• RNA适配体工具：利用 Pepper 适配体结合荧光蛋白，实现信号放大。