完全摆脱PAM限制
将dsDNA直接转化为ssDNA，使Cas12a无需PAM即可切割信号，适用于任何无PAM位点的靶标。
Cao, Gaihua · Xiong, Yifan · 王兰 · 霍丹群 · 侯长军
ACS Sensors 2023
通过不对称RPA扩增，将双链DNA直接转化为单链DNA，Cas12a无需识别PAM即可激活反式切割活性，所有无PAM位点的双链靶标均可检测。
扩增产物为单链DNA，可直接用于Cas12a切割反应，省去了传统方法中热变性或化学变性的步骤，简化了操作流程。
在1%混合样品中可检测到1 fM的耐药突变型结核分枝杆菌，适用于野生型与耐药型的区分，对指导用药有重要意义。
对疙瘩皮肤病病毒的实际检出限低至1.21×10¹ copies·μL⁻¹，证明该平台在真实病原体检测中的高灵敏度。