分支DNA开关

超灵敏检测FEN1

一种可被FEN1激活的CRISPR-Cas12a开关，让FEN1活性检测在试管内和细胞内都能直接进行，无需复杂前处理。

Li, Xingrong · 张德才 · Xiaoying, Cai · Xiaojia, Shu · Zijie, Zeng · 丁世家 · 颜玉蓉

Chemical Engineering Journal 2023

技术优势

背景更低

分支DNA的5'端悬垂结构产生空间位阻，阻止其有效激活Cas12a，只有FEN1切割后才能形成可激活的DNA片段，从而降低非特异性信号。

不用预处理

检测步骤仅需将分支DNA、Cas12a和荧光报告探针与样本混合，无需分离或洗涤步骤，直接通过荧光信号定量FEN1活性。

能进细胞

该策略已成功用于细胞内FEN1成像，表明分支DNA和Cas12a可递送并保持功能，为活细胞内酶活性监测提供工具。

应用场景

• 癌症标志物检测：FEN1在多种肿瘤中高表达，此方法可快速检测其活性用于癌症早筛。
• CRISPR诊断：将FEN1识别与CRISPR-Cas12a信号放大结合，实现无需扩增的灵敏检测。
• 即时检验：无需复杂仪器，混合即可读荧光，适合现场快速检测。
• 细胞内传感：已实现细胞内FEN1成像，可监测活细胞内的酶活性。