免预构建菌株
利用携带bla-mkan盒的BAC载体和表达显性mutL E32K的Red辅助质粒，替代传统CoS-MAGE所需的预构建菌株，实现大肠杆菌染色体的高效多重自动化编辑。
Junyu, Wang · 王红 · 尚广东
Biotechnology Letters 2024
使用携带bla-mkan盒的单拷贝BAC载体和表达显性mutL E32K的Red辅助质粒，直接转化野生型大肠杆菌即可进行编辑，省去了构建和保存专用宿主菌的步骤。
在野生型大肠杆菌MG1655中实现60%的编辑效率，对非必需基因、必需基因和AT富集区均有效。
通过在BAC上切换两个抗生素抗性基因（一个有活性，另一个有缺陷），无需消除和重新转化BAC载体即可实现连续突变。
该系统可在一天内同时获得三个位点的突变，缩短了多重编辑的时间。