80–100%成功敲除基因
把传统PCR中需要多轮克隆的基因突变操作压缩成一个共转化步骤，一步获得目标突变体质粒。
Wang, Jinyu · Li, Yawen · 尚广东
Biotechnology Letters 2023
通过共电穿孔导入目标质粒、sgRNA表达质粒和诱变寡核苷酸，利用λ-Red重组和Cas9切割提高重组效率，无需多轮克隆。
在氨苄青霉素抗性基因修复和N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶诱变中，突变效率达到80–100%，几乎无需筛选。
单次饱和诱变实验即可获得目标位点全部20种氨基酸编码变体，覆盖完整突变空间。