CRISPR单碱基检测法

百分百区分突变

结合引物错配与Cas12a切割，实现对单碱基突变的完全特异性识别，野生型不产生信号。

Chao, Ling · Chang, Yanbin · Xingyue, Wang · Xiaoying, Cao · Qianrong, Tu · 刘渤 · 黄世峰

Analytica Chimica Acta 2023

参数信息

灵敏度（方法1）
~6 copies μL-1
检测时间（方法2）
1 h

技术优势

100%区分突变

通过引物错配或RPA产物修饰，野生型不触发Cas12a切割，仅突变型产生荧光信号。

方法1灵敏度达约6拷贝/μL

通过调整引物3′端错配碱基和PCR条件，可检测到单个拷贝的DNA。

方法2可在1小时内完成

采用等温RPA扩增，无需热循环，并引入额外错配碱基阻止野生型触发切割，操作简便快速。

应用场景