迭代多重编辑高效便捷
一个经过改造的酵母菌株配合简化CRISPR-Cas9系统，实现无需质粒清除的迭代基因编辑和多靶点同时编辑。
Zhao, Shuo · Zhao, Liqian · 朱志伟
Biotechnology and Bioengineering 2024
通过削弱NHEJ并增强同源重组，使40 bp同源臂足以进行同源定向修复，降低了供体DNA构建难度。
构建整合表达Cas9的菌株，配合携带不同筛选标记的gRNA质粒，迭代编辑时无需去除旧质粒。
利用tRNA-gRNA阵列高效加工gRNA前体，实现至少4个靶点的同时编辑。
体内将三个片段无疤组装成12-kb表达盒，成功表达融合脂肪酸合酶。